الاختلافات بين حيوانات المزرعة في عمليتي الإنضاج والإخصاب المجهري معملياً

الاختلافات بين حيوانات المزرعة في عمليتي الإنضاج والإخصاب المجهري معملياً

أجري هذا البحث لدراسة معدل تجميع و نوعية البويضات علي عملية الإنضاج المعملي لبويضات النوق حيث تم ذلك في تجربتين:-
التجربة الأولي:
أجريت لدراسة تأثير طريقة الجمع والحالة التناسلية وجهة المبيض علي معدل التجميع و ونوعية البويضات المجمعة. ولذلك تم عد كل الحويصلات المبيضية المرئية ذات القطر من 2-8 مم والموجودة علي سطح المبيض وتم جمع البويضات منها باستخدام طريقتين وهما طريقة الشفط وطريقة التشريح. تم تسجيل كمية البويضات لكل طريقة من طرق الجمع وأيضاً عدد البويضات لكل مبيض.
كان يتم تقييم البويضات تحت الميكروسكوب ( Inverted microscope) كالتالي:-
- البويضات الجيدة: بويضات عليها 5 طبقات أو أكثر من خلايا التراكم المبيضي وذات سيتوبلازم متماثل ومتجانس ولونه ترابي.
- بويضات مقبولة أو متوسطة: بويضات عليها من 1-4 طبقات من خلايا التراكم المبيضي وذات سيتوبلازم متجانس ولونه ترابي.
- بويضات معراة جزئياً: بويضات عليها جزء عاري من خلايا التراكم المبيضي وجزء عليه خلايا.
- بويضات معراة: بويضات ليس عليها خلايا(معراة) ومحاطة فقط بالطبقة الشفافة.
- بويضات غير صالحة: بويضات ذات سيتوبلازم به أماكن مظلمة أو السيتوبلازم منكمش أو به فراغات.
- بويضات منقسمة: بويضات منقسمة (خليتين أو 8-6 خلايا أو في طور الموريولا).

التجربة الثانية:
في هذه التجربة تم دراسة تأثير ثلاثة أنواع من المصل كانت تضاف إلي بيئة زراعة البويضات وهي (مصل جنين الجمال وكان يضاف إلي بيئة الإنضاج بنسبة 10% ، مصل طلائق الجمال وكان أيضاً يضاف بنسبة 10% و أليومين مصل الأبقار وكان يضاف بنسبة 6مجم/ملل وكذلك الحالة التناسلية (عشار - غير عشار) و جهة المبيض (يمين – شمال) علي عملية الإنضاج المعملي لبويضات النوق ذات الدرجة الأولي والثانية التي جمعت بطريقة الشفط في التجربة الأولي.
حيث تم زراعة هذه البويضات في جهاز التحضين علي درجة حرارة 39°م و 5% ثاني أكسيد كربون ورطوبة عالية 100% وذلك لمدة 42 ساعة. بعد هذه المدة كان يتم تثبيت البويضات في محلول تثبيت عبارة عن كحول إيثايل وحمض خليك ثلجي بنسبة 3 : 1 لمدة 24- 48 ساعة ويتم صبغها بصبغة الأورسين وكانت تفحص كالتالي:
- Germinal vesicle: و فيها تكون الكروموسومات مغلفة بالغشاء النووي.
- Germinal vesicle breakdown: وفيها يبدأ غياب الغشاء النووي المرئي وتكثيف للكروماتين والذي يميز بواسطة عنقود من مادة الـDNA بدون كروموسومات فردية.
- Metaphase І (الطور الميتوزي الأول): وفيها تتكاثف الكروموسومات في أزواج بدون ظهور الجسم القطبي الأول(بويضات غير ناضجة).
- Metaphase ІІ (الطور الميتوزي الثاني): وفيه تكون هناك مجموعة كبيرة من الكروموسومات تكون الطور الاستوائي وتبقي الكروموسومات عالية التكثيف أو يحدث طرد للجسم القطبي الأول.
- Degenerated: وفيها يكون الكروماتين متحوصل أو متبعثر أو عالي التكثيف.

وكانت أهم النتائج المتحصل عليها كالتالي:
1- الخصائص المورفولوجية لمبايض النوق:
1-1- وزن المبيض:
وزن المبيض كان أثقل معنوياً (P<0.0001) بحوالي 73% بالنسبة لمبايض النوق العشار عن غير العشار ولم يكن هناك تأثير معنوي بالنسبة لجهة المبيض أيمن و أيسر علي الوزن (5.68 و 5.25).
1-2- عدد الحويصلات لكل مبيض:
المتوسط العام لعدد الحويصلات لكل مبيض كان 12.7 حويصلة وكان هناك زيادة في عدد الحويصلات لكل مبيض في مبايض النوق العشار عن غير العشار بحوالي 15% .
- كان عدد الحويصلات علي المبيض الأيمن أعلي من عددها علي المبيض الأيسر (13 مقابل12.4).
1-3- عدد البويضات لكل مبيض ومعدل الاسترداد لعدد البويضات الكلي:
- كان عدد البويضات لكل مبيض عالي معنوياً بحوالي 55% في طريقة التشريح عن طريق الشفط.
- كان عدد البويضات لكل مبيض متشابه تقريباً في النوق العشار وغير العشار (3.96 مقابل 4.01).
- كان معدل الاسترداد لعدد البويضات الكلي عالي بدرجة غير معنوية في مبايض النوق غير العشار عن العشار (33.91 مقابل 29.2%).
- متوسط عدد البويضات لكل مبيض و معدل التجميع يتجه إلي أن يكون عاليا في المبيض الأيمن عن الأيسر (4.23 و32.5 مقابل 3.74 و30.14).
- كان متوسط عدد البويضات لكل مبيض عالياً في النوق العشار عن غير العشار عند استخدام طريقة الشفط لجمع البويضات (3.7مقابل3.15) وكان عالي معنوياً ( P<0.01) في النوق العشار عن غير العشار عند جمع البويضات بطريقة التشريح في (5.81 مقابل4.77).

2- التوزيع النسبي للبويضات الطبيعية:
- كان التوزيع النسبي للبويضات الطبيعية عالياً باستخدام طريقة الشفط (52.3%) مقارنة بطريقة التشريح (47.53).
- عموماً التوزيع النسبي للبويضات الطبيعية كان 50.84% و التوزيع النسبي للبويضات المنقسمة كان أقل (2.95%) بالمقارنة بباقي درجات البويضات.
- كان التوزيع النسبي للبويضات الطبيعية عالياً في مبايض النوق العشار (15.7%) مقارنة بمبايض النوق غير العشار (49.2%).
- كان التوزيع النسبي للبويضات الطبيعية أعلي في المبيض الأيسر (51.51%) عن المبيض الأيمن (49.57%).
- عموماً باستخدام طريق الشفط ظهر أعلي توزيع نسبي للبويضات الطبيعية من المبيض الأيسر (54.16%) و المبيض الأيمن (50.85%) عن البويضات الطبيعية من المبيض الأيمن (47.26%) والمبيض الأيسر (47.78%) باستخدام طريقة التشريح.
- هذه النتائج تشير إلي أن أعلي توزيع نسبي (55.3%) للبويضات الطبيعية وذات الجودة العالية (علي أساس عدد البويضات المجمعة) تم الحصول عليه عندما كان يتم جمع البويضات بطريقة الشفط من المبيض الأيمن للنوق العشار.

3- الإنضاج المعملي للبويضات المجمعة:
- كان معدل الإنضاج المعملي للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني 39.3% بغض النظر عن نوع السيرم المستخدم في بيئة الإنضاج والحالة التناسلية ومكان المبيض.
- وجود الجسم الأصفر في مبايض النوق العشار نتج عنه توزيع منخفض للبويضات التي توجد في مرحلة Germinal vesicle (GV.) وتوزيع عالي للبويضات التي توجد في مرحلة Germinal vesicle breakdown (GVBD.).
- البويضات المستردة من مبايض النوق غير العشار أظهرت توزيع عالي معنوياً (P<0.001) للبويضات التي توجد في مرحلة الطور الميتوزي الأول والثاني وتوزيع أقل معنوياً (P<0.001) للبويضات المضمحلة عن البويضات التي تسترد من مبايض الحيوانات العشار.
- من الجدير بالملاحظة أن البويضات المستردة من مبايض النوق غير العشار أظهرت توزيع عالي معنوياً (P<0.001) للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني (42.54%) عن البويضات النوق من الجمال العشار (36.13%).
- بغض النظر عن الحالة التناسلية كانت البويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني تمثل توزيع عالي بمتوسط 39.26% في كلتا الحالتين من المبايض (عشار وغير عشار). وأظهرت البويضات التي في مرحلة الـ GV. أقل توزيع.
- البويضات المستردة من المبيض الأيسر أظهرت توزيع منخفض معنوياً (P<0.05) للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الأول وتوزيع عالي للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني مقارنة بالمبيض الأيمن. لكن الـ GV. و GVBD. والبويضات المضمحلة كانت متشابهة تقريباً للبويضات المستردة في كلتا الحالتين (أيمن وأيسر).
- تشير النتائج إلي أن هناك توزيع عالي معنوياً (P<0.05) لبويضات النوق التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني والمستردة من المبيض الأيسر عن المبيض الأيمن (41.10مقابل 37.42%).
- كان توزيع البويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني عالي معنوياً (P<0.001) والبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الأول أقل معنوياً (P<0.001) عندما زرعت هذه البويضات في بيئة الاستزراع المضاف إليها سيرم جنين الجمال عن المضاف إليها سيرم طلائق الجمال أو ألبومين السيرم البقري.
- أظهرت البويضات المستردة من مبايض النوق العشار والتي استزرعت في بيئة الاستزراع المضاف إليها سيرم جنين الجمال توزيعاً عالياً للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني (48.9%) مقابل توزيع منخفض للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني والمستردة من مبايض النوق العشار والتي استزرعت في بيئة الاستزراع المضاف إليها ألبومين سيرم الأبقار (34.1%).
- النتائج الحالية ربما تشير إلي معدل إنضاج عالي لبويضات النوق التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني بإستخدم البويضات المستردة من المبيض الأيسر والتي استزرعت في بيئة الاستزراع المضاف إليها سيرم جنين الجمال.
- أظهرت البويضات المستردة من المبيض الأيسر للنوق غير العشار توزيع عالي لمعدل الإنضاج للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني (50.4%) عندما يضاف سيرم جنين الجمال إلي بيئة الاستزراع.

# المستخلص:
تشير نتائج الدراسة الحالية إلي أن أعلي معدل تجميع لعدد البويضات الكلي كان عند استخدام طريقة التشريح لجمع بويضات النوق من المبيض الأيمن للحيوانات غير العشار . أعلي توزيع نسبي للبويضات الطبيعية في المبيض الأيمن للنوق العشار باستخدام طريقة الشفط. أعلي معدل إنضاج للبويضات التي وصلت لمرحلة الطور الميتوزي الثاني وجد في البويضات المستردة من المبيض الأيسر للجمال غير العشار باستخدام طريقة الشفط وأيضاً بإضافة سيرم جنين الجمال إلي بيئة الاستزراع.